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詳細信息

【分子平臺】甲基化檢測

 實驗原理

DNA甲基化存在于大多數真核生物中,一般發生在CpG雙核苷酸中胞嘧啶的5’UTR區,起調控作用。CpG的胞嘧啶大概有80%被甲基化,20%處于基 因調控區的CpG島中。BSP甲基化測序(Bisulfite Genomic Sequencing PCR)的原理通過對基因組DNA進行重亞硫酸鹽處理,非甲基化的胞嘧啶被脫氨基而轉變成尿嘧啶,在隨后的PCR反應中尿嘧啶轉變成胸腺嘧啶,而甲基化的 胞嘧啶不能被脫氨基,在反應完成時被保留,我們將擴增得到的PCR產物進行TA克隆測序,就可以分析甲基化發生的具體情況。該方法實驗結果準確 性高,是甲基化檢測的金標準。

實驗流程

 

甲基化檢測.png

 

 

甲基化.png

 

 

 

注意事項

①組織樣本提供黃豆大小即可,細胞樣本提供10^5的細胞數

②速凍后的新鮮組織、細胞,DNA樣本量>7μg,干冰運輸

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