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詳細信息

【分子平臺】RT-PCR檢測

 實驗原理

RT-PCR即逆轉錄pcr,其原理是提取組織或細胞中的總RNA,利用Oligo(dt)或隨機引物反轉錄,獲得cDNA模板,進一步通過PCR反應獲得目的基因產物或檢測其表達水平。與其他技術相比,RT-PCR技術更加靈敏易于操作,在細胞/組織基因表達水平的半定量檢測,特定基因cDNA克隆及RNA病毒檢測等分子生物學領域得到廣泛應用。


實驗流程
 

qPCR檢測.png

  

 

 

熒光定量PCR.png


樣本保存處理及運輸方式
 

pcr樣本形式1.png

   

實驗結果展示
        

pcr -溶解曲線.jpg
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注意事項:

1.在30min內完成組織操作,并立即放入-80℃或液氮中保存。
2.有條件的話,最好先將樣本在液氮中速凍,再轉入-80℃冰箱中保存。
3.使用的凍存管最好也用DEPC處理。
4.對于組織及細胞樣本,如果沒有液氮或-80℃冰箱,也可用RNAlater保存,但是組織一定要切成比較小的塊狀,-20℃保存運輸。
5.少量指標,組織需要提供的樣本量要求50mg或更多;細胞樣本需要提供六孔板一個孔的細胞量或更多。

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