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你所熟知的elisa知識小匯總--質控標準

     1971年Engvall和Perlmann發表了酶聯免疫吸附測定( elisa)用于IgG定量測定的文章,使得該技術發展成液體標本中微量物質的常用測定方法。本文將帶你一一熟知elisa技術的核心質控標準。

 
    elisa的基礎是抗原抗體反應,在檢測時,樣本中的抗原或者抗體與固相載體表面的抗原或者抗體反應形成復合物,再用酶標的抗原或者抗體進行顯色系統反應,當底物被催化顯色后可直接相關聯待檢測標本中的物質含量。按照原理及操作一般可將elisa分為四類:直接elisa,間接elisa,雙抗夾心elisa,競爭抑制elisa。其他elisa都是隸屬于這四類或者組合衍生。
 
    下面我們將對每一類進行細解。
 
    直接elisa
 
    直接elisa是最簡單的一種,其方法是抗原按照一定濃度包被在固相載體上,洗滌孵育后,只需加入一種特異性的酶標抗體,再經過底物顯色反應即可判讀結果。此方法可常用于單抗亞型和血清種屬等檢測。但由于直接法只經過了一步信號放大,其靈敏度有限,所以它的應用范圍也是有限的。
 
    間接elisa
 
    間接elisa的過程中加入了一種非酶標抗體,與固相載體的抗原結合,再用酶標二抗特異性結合,最后加入底物顯色。此方法由于信號經過了兩步方法,提高了檢測靈敏度。另外所有相同種屬的一抗均可以同用一種酶標二抗,這樣科研工作者就無需進行一抗標記了,大大的縮減了工作量,是目前常用的方法手段。
 
 
    雙抗夾心elisa
 
    可分為雙抗原夾心法和雙抗體夾心法,其原理都是一樣的。比如雙抗體夾心法,捕獲抗體包被在固相載體上,加入抗原結合,再次加入的檢測抗體結合在抗原上,一起形成“sandwich”夾心。此方法的檢測對象必須是多價抗原,包含兩個或者兩個以上的表位,一般為大分子蛋白。對于各種天然的免疫蛋白類分子大多都是采用這種檢測方法。
 
    競爭抑制elisa
 
    其主要原理是用待檢抗原或抗體去干擾已經預先設計好的體系,最終顯色的結果與待檢抗原或抗體的干擾程度成負相關。這種方法多是應用于小分子抗原或者半抗原,只要有一個結合部位即可。

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