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丙二醛(MDA)終點比色法定量檢測試劑盒產品說明書

丙二醛(MDA)終點比色法定量檢測試劑盒產品說明書 主要用途 丙二醛(MDA)終點比色法定量檢測試劑是一種旨在通過TBARS(硫代巴比妥酸反應物)技術,檢測與之反應的丙二醛,其產物丙二醛雙硫代巴比妥酸加合物,在分光光度儀下,檢測其吸光峰值的變化,即采用比色法測定樣品中總丙二醛含量的權威而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種動物、人體等細胞、組織、血液、體液、培養液丙二醛的含量檢測。廣泛用于細胞氧化應急研究,特別是脂質過氧化的分析。產品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩定,重復性好。 技術背景 脂質過氧化反應(lipid peroxidation;LPO)是動物和植物細胞損傷的一種機制,也是評價細胞和組織氧化應急的標志。含有兩個或以上雙鍵(double bond)的多不飽和脂肪酸(Polyunsaturated Fatty Acid)對自由基以及其它活性氧化族高度敏感,導致產生脂質過氧自由基LOO+(lipid peroxyl radical),使脂類氧化(lipid oxidation)。脂質過氧化自由基LOO+同時通過攻擊分子內雙鍵,經環化、裂解形成環狀內過氧化物(cyclic endoperoxide),例如丙二醛(malondialdehyde;MDA)。作為脂質過氧化性低分子量終端產物之一的丙二醛,廣泛用于脂質過氧化反應的指標。在丁羥甲苯(Butylated Hydroxytoluene;BHT)和EDTA的參與幫助減少干擾性脂類氧化的情況下,丙二醛與硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid;TBA)進行反應,產生丙二醛雙硫代巴比妥酸加合物(MDA-TBA2),通過分光光度儀(532nm波長)來定量分析丙二醛的含量,其反應方式為: malondialdehyde +2 thiobarbituric acid → MDA-TBA2 產品內容 抗干擾液(Reagent A) 500微升 萃取液(Reagent B) 1.25毫升 反應液(Reagent C) 5管 補充液(Reagent D) 10毫升 稀釋液(Reagent E) 1.5毫升 產品說明書 1份 保存方式 保存在4℃冰箱里,抗干擾液(Reagent A)和反應液(Reagent C)避免光照,并密封;萃取液(Reagent B)具有腐蝕性,注意操作安全;有效保證6月 用戶自備 恒溫培養箱:用于反應孵育 酶標板:用于比色的容器 酶標儀:用于樣品比色分析 實驗步驟 實驗開始前,將試劑盒中的反應液(Reagent C) 置入冰槽里。移取250微升稀釋液(Reagent E)到 反應液(Reagent C)管里,渦旋混勻,標記為反應工作液(10次操作量)。同時設定好酶標儀(溫度為25℃):波長532nm,并置零。然后進行下列操作。 1.準備好1個96酶標板孔,并做好相應標記:背景對照和樣品 2.分別移取140微升補充液(Reagent D) 3.分別加入10微升抗干擾液(Reagent A) 4.分別加入50微升補充液(Reagent D)或待測樣品(注意:總量為1至2毫克總蛋白) 5.用槍頭混勻 6.分別加入25微升萃取液(Reagent B) 7.用槍頭混勻 8.分別加入25微升反應工作液 9.輕輕搖動酶標板,混勻 10.放進60℃恒溫培養箱,孵育60分鐘 11.放進酶標儀檢測 12.樣品實際讀數:(樣品讀數-背景對照讀數) 13.計算樣品總濃度 [樣品實際讀數X樣品稀釋倍數X 0.25(毫升,測定容量)]÷[0.05(樣品容量,毫升)X 156(毫摩爾吸光系數)X 0.6]=微摩爾/毫升÷(樣品蛋白濃度)毫克/毫升=微摩爾/毫克 注意事項 1.本產品為50次(96孔板)操作 2.操作時,須戴手套 3.萃取液(Reagent B)具有腐蝕性,注意操作安全 4.反應液(Reagent C)為固體,避免在室溫下放置;配制后,有效期1周 5.抗干擾液(Reagent A)和反應液(Reagent C)避免光照,并密封 6.本產品檢測敏感度可達0.05微摩爾丙二醛 7.50微摩爾的過氧化氫會干擾檢測(使丙二醛減少13%);而蔗糖和果糖則不影響檢測 8.如果樣品含有過高的蛋白成分,建議進行樣品去蛋白處理 9.如果待測樣品濃度過高或過低,可以調整樣品濃度 10.正常樣品的丙二醛濃度相當低,約在皮摩爾水平,即10至100皮摩爾/毫克蛋白 11.本公司提供系列丙二醛檢測試劑產品 質量標準 1.本產品經鑒定性能穩定 2.本產品經鑒定檢測敏感

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