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詳細信息

PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒產品說明書

 PicoGreenDNA熒光定量測定試劑盒品說明書

 

主要用途

 

 PicoGreenDNA熒光定量測定試劑是一種旨在通過使用PicoGreen熒光染料與樣品中雙鏈DNA的高度特異性結合而產生熒光信號來精確定量樣品中DNA含量的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種原核生物和真核生物的細胞或組織DNA以及環境中DNA含量分析。產品嚴格無菌,即到即用,性能穩定,高度敏感。

 

技術背景

 

作為DNA染色劑之一的PicoGreen熒光染料特異性地樣品中雙鏈DNA結合,產生熒光信號。PicoGreen技術可以檢測到低達0.5納克雙鏈DNA的變化。DNA的微量增加引起熒光信號強度(Intensity)或相對熒光單位(RFU)的顯著增加。其自發熒光(Autofluorescence)忽略不計,重復性標準差異(Standard Deviation)低,不受樣品化學成分的干擾。

 

產品內容

 

染色液Reagent A       62.5微升

稀釋液(Reagent B       15 毫升

標準液(Reagent C            1

產品說明書                 1份

 

保存方式

 

保存染色液Reagent A)和標準液(Reagent C在-20℃冰箱里,其余的保存在4冰箱里,染色液(Reagent A)避免光照,有效保證6

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管:用于工作液配制的容器

比色皿或96孔板:用于熒光分析的容器

熒光分光光度儀或熒光酶標儀:用于熒光定量分析

 

實驗步驟

 

一、 測定準備

 

1. 準備好待測樣品,置于冰槽里

2. 設定好熒光分光光度儀(溫度為37℃):激發波長480nm,散發波長530nm,并置零 

3. 實驗開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的染色液(Reagent A置于冰槽里融化。然后移出5毫升稀釋液(Reagent B到新的15毫升離心管,加入25微升染色液(Reagent A,混勻后,用錫紙包裹,標記為染色工作液,放在暗室里。然后進行下列操作。

 

二、 構建標準曲線

 

1. 準備好51.5毫升離心管,標記為15號管

2. 分別加入500微升稀釋液(Reagent B到每個離心管

3. 移取500微升標準液(Reagent C1號管,混勻

4. 小心移取500微升1號管稀釋的標準液(Reagent C2號管,混勻

5. 小心移取500微升2號管稀釋的標準液(Reagent C3號管,混勻

6. 小心移取500微升3號管稀釋的標準液(Reagent C4號管,混勻

7. 15號管放進冰槽里備用;標準管含量見下表

 

管號

緩沖液(Reagent B

標準液(Reagent C

標準DNA總量

1

500微升

500微升

1微克

2

500微升

500微升1號管

0.5

3

500微升

500微升2號管

0.25

4

500微升

500微升3號管

0.125

5

500微升

空對照

0

 

8. 移取500微升含有染色液(Reagent A稀釋液(Reagent B染色工作液新的比色皿

9. 加入500微升上述配制的標準液

10. 室溫下,孵育5分鐘,避免光照

11. 即刻放進熒光分光光度儀測讀:獲得相對熒光單位(Relative Fluorescence Unit;RFU

12. 重復實驗步驟811四次

13. 繪制標準曲線:縱座標(Y軸)為相對熒光單位(RLU);橫坐標(X軸)為DNA含量(微克)

 

三、 樣品檢測

 

1. 移取500微升含有染色液(Reagent A稀釋液(Reagent B染色工作液新的比色皿

2. 加入500微升待測樣品

3. 室溫下,孵育5分鐘,避免光照

4. 即刻放進熒光分光光度儀測讀:獲得相對熒光單位(Relative Fluorescence Unit;RFU

5. 根據標準曲線獲得樣品對應DNA含量微克

6. 樣品實際DNA濃度:

[根據標準曲線獲得樣品對應DNA含量(微克)X樣品稀釋倍數]0.5(樣品容量;毫升)=微克/毫升

 

 

注意事項

 

1. 本產品為20次(比色皿100次(96孔板)操作,包括標準曲線測定

2. 操作時,須戴手套

3. 使用新鮮配制的染色工作液,務必不要超過2小時,且注意避光

4. 建議使用塑料管配制染色工作液,而不是玻璃制品

5. 孵育時,避免光照

6. 系統檢測,標準曲線測定1次即可;如果儀更換,則需要重新測定1

7. 如果熒光讀數過高,可以相應稀釋樣品量

8. 可以使用熒光酶標儀檢測,試劑用量和體系均除以5,包括標準DNA含量,其計算公式

 

[根據標準曲線獲得樣品對應DNA濃度(微克X樣品稀釋倍數0.1(樣品容量;毫升)微克/毫升

 

9. 鹽類、尿素、乙醇、lv仿、去垢劑、蛋白、瓊脂糖、單鏈DNARNA不會干擾檢測

10. 本公司提供系列DNA檢測試劑產品

 

質量標準

 

1. 本產品經鑒定性能穩定

本產品經鑒定高度敏感

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