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ELISA試劑盒檢測不成功的原因

ELISA試劑盒即酶聯免疫吸附試驗,是一種常用的固相酶免疫測定方法。 由于ELISA方法靈敏 ,特異性強不需要特殊設備,所以被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因 素較多,而且其操作中有一定的技術要求,在臨床檢驗中除正常反應外,有時??梢姷揭恍╁e 誤結果(即假陽性或假陰性);本司在這里為大家解讀下ELISA試劑盒檢測的影響因素中標本 的影響。

溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產生假陽性??赡苁侨苎逯泻羞^ 氧化酶物質(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),在洗滌過程中往往難以完全洗脫,它可使 H2O2釋放出原生態氧(O),從而催化底物四甲基聯苯胺生成可溶性的有色物質,即顯藍色, 產生假陽性[2]。所以嚴重溶血標本禁用。

標本受細菌污染。因菌體中可能含有內源性辣根過氧化物酶,因此,被細菌污染的標本同 溶血標本一樣,亦可產生非特異性顯色而干擾測定結果。

標本保存不當。在冰箱中保存過久的標本,在間接法ELISA測定中會導致本底過深、造成 假陽性;為克服上述干擾,ELISA試劑盒測定的血清標本宜為新鮮采集;如不能立即測定,5 d 內測定的血清標本可存放于4℃,1周后測定的血清標本應低溫凍存;凍存后融解的標本,蛋白 質局部濃縮,分布不均,應充分混合后再測定,但混勻時應輕柔,不可強烈振蕩。

塑料試管能吸附抗原物質,樣本久置在塑料管內會使樣本內抗原含量下降造成假陰性。最 好使用真空采血管;并使用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會增加OD值,EDTA、酶抑制劑(如NaN3 )可抑制ELISA系統中辣根過氧化物酶活性。

標本凝固不全。 在工作中,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強 行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的 纖維蛋白塊,易造成假陽性結果;因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。

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