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高靈敏ELISA試劑盒操作步驟中的忌諱

 ELISA試劑盒實驗中每一個步驟都尤為重要,細節不容忽視,它是實驗成功的關鍵與否;在這

 
里本司為方便各位了解,更好的完成實驗,特對高靈敏ELISA試劑盒操作步驟中的忌諱做出以
 
下分析,供大家參考:
 
1、吸取液體時速度不易太快,以免產生氣泡,吸取的量不夠準確。
 
2、手工洗板時每次加入洗滌液后。應靜置15~30s,不要將一個酶標孑L中的洗滌液濺入另一
 
酶標孔中,防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。
 
3、底物為TMB,避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性,應盡量避免接觸皮
 
膚。
 
4、加樣后及時放人孵箱,標本較多時,要分批操作。按說明步驟嚴格控制操作時間,防止孵育
 
時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗徹底。
 
5、作時必須戴手套,穿工作衣,嚴格健全和執行消毒隔離制度。
 
6、剩余樣品及廢棄物應經121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分
 
鐘后廢棄。
 
7、同批號試劑組分不得混用。
 
8、洗滌時各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。
 
9、每次實驗留一孔作為空白調零孔,該孔不加任何試劑,只是最后加底物溶液及2N H2SO4。
 
測量時先用此孔調OD值至零。
 
10、要確保微量加樣器的準確性,可以使用蒸餾水和電子天平進行確定(由于蒸餾水不含雜質
 
,溫度環境為20%左右時,lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加樣
 
器都應該將其最高量程和最低量程進行確定。
 
11、在使用微量加樣器時,吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭,即使吸取標準品溶液。
 
12、檢驗技師應具備從事實驗室操作的基本素質和實踐經驗。能熟練操作實驗儀器、器械,具
 
有一定總結和分析問題的能力,對實驗中出現的意外情況能及時妥善解決。
 
13、操作前仔細閱讀說明書,嚴格按照說明書要求進行規范化操作。不同批號的試劑不可混用
 
。值得改進的地方,反復試驗確定成立后才能改進,比如洗板次數的掌握等。
 
14、評估試劑的實用性,試劑的穩定與否,對準確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,應進行
 
陰、陽對照及樣品反復比照試驗,判定試劑符合要求后方可使用。
 
15、加樣要準確、快速。加樣不準確,酶生成物的量不能確定,直接影響顯色結果。另外,顯
 
色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關,所以加樣應慎重。要求在一定時間內加
 
樣完畢的實驗,如果加樣遲緩,便出現誤差,而且試劑長時間暴露在外,尤其室溫過高時,保
 
存期會縮短甚至失效。
 
16、使用校對過的微量移液器,排除自然誤差。移液器準確與否對定量檢測尤為重要
 
17、嚴格掌握顯色時間,顯色時間過短,加入終止液反應終止后,底物結合物的量過少,易出
 
現假陰性。超過顯色要求時間后顯色,應判為假陽性,這可能與試劑本身有關。加顯色劑后立
 
即顯色,不可報陽性,這可能是本底顯色的結果。
 
18、洗滌徹底,洗板不徹底,酶結合物本底顯色會呈現假陽性。另外,洗滌液要新鮮,現用現
 
配,陳舊的洗滌液會出現本底增高現象,也可能出現假陽性。
 
19、嚴控反應時間,反應時間過長,酶失活;反應時間過短,酶結合物不能與血清中的微生物
 
抗原抗體充分結合,生成物結構松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性。
 
20、ELISA檢測操作步驟復雜,可強各環節的質量控制,才能得到準確可靠的檢測結果。
 
愿以上這些能對您有所幫助,如果您還有什么疑問,歡迎來電我司咨詢。

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